¿Qué es cPass y cómo funciona?

Es un test ELISA de neutralización subrogado capaz de detectar el nivel de anticuerpos neutralizantes específicos contra la unión RBD-ACE2 presentes en el suero humano de personas infectadas y/o vacunadas. Esa unión es imprescindible para que exista infección por tanto si detectamos su bloqueo detectamos la presencia de anticuerpos que de verdad impiden el contagio y no solo cualquiera que genere el organismo.

Si hay AcN en la muestra, estos se unirán al dominio RBD conjugado a la enzima peroxidasa (HRP). Con los AcN neutralizando el RBD-HRP, éste no interaccionará con los ACE2 de la microplaca.

Si no hay AcN, el RBD-HRP estará disponible para interaccionar con ACE2. Tras los procesos de lavado y de revelado, se detectará la señal colorimétrica proveniente de cada pocillo en función de la cantidad del complejo RBD-HRP-ACE2 formado. Por tanto, la relación entre el nivel de AcN y la señal detectada es inversamente proporcional.

A mayor cantidad de AcN, menor RBD-HRP presente y, por tanto, menor señal. (2,3,4). cPassTM Permite cuantificar esta relación mediante el uso de una curva patrón (ver gráfica)

escenario 1

Cuando cPass no detecta anticuerpos neutralizantes (aunque si puede haber presencia de anticuerpos no válidos) y en consecuencia no hay inmunidad protectora

Si no hay Anticuerpos neutralizantes ( puede haber de otro tipo) , el RBD-HRP estará disponible para interaccionar con ACE2.

Tras los procesos de lavado y de revelado, se detectará la señal colorimétrica proveniente de cada pocillo en función de la cantidad del complejo RBD-HRP-ACE2 formado.

escenario 2

Cuando cPass detecta anticuerpos neutralizantes y en consecuencia hay inmunidad protectora

Si no hay Anticuerpos neutralizantes ( puede haber de otro tipo) , el RBD-HRP estará disponible para interaccionar con ACE2.

Tras los procesos de lavado y de revelado, se detectará la señal colorimétrica proveniente de cada pocillo en función de la cantidad del complejo RBD-HRP-ACE2 formado.

¿Cómo infecta el virus SARS-CoV-2?

La puerta de entrada del virus a la célula hospedadora se basa en la interacción clave entre la región de unión o RBD de la proteína viral S (spike o espícula) y el receptor ACE2 en la superficie celular humana (2,3,4).

¿Qué es la respuesta inmune – humoral?

Es el mecanismo principal de defensa de nuestro organismo frente a las infecciones, mediante el reconocimiento de antígenos y la producción de anticuerpos que se unen al virus y lo desactivan. El organismo de los pacientes infectados por SARS-CoV-2, así como quienes han sido vacunados, desarrolla estos Ac específicos que pueden detectarse mediante ensayos tradicionales como ELISA* (Enzyme-Like ImmunoSorbent Assay) (2,3,4,5,6,7) Estos Ac pueden ser de dos tipos: de unión o neutralizantes

¿Qué son los Anticuerpos Neutralizantes? (AcN)

Son los anticuerpos que nos protegen neutralizando el SARS-CoV-2, es decir, impidiendo que infecte las células humanas. Las personas infectadas (95%) y aquellas que han sido vacunadas desarrollan un alto número de Ac detectables frente a la proteína S y, de ellos, solo algunos bloquean la unión RBD-ACE2.(2,3,4). Está demostrada la relación entre el nivel de estos AcN y la protección clínica. Además, su presencia también se relaciona con la severidad y duración de la enfermedad (5,6,7).

Aplicaciones

Interpretación de resultados cPass

Cantidad exacta de anticuerpos protectores

Tras la infección o la vacunación, generamos una mezcla de anticuerpos (IgG, IgM, IgA) contra diferentes partes del virus, pero no todos se unen a la proteína S.

De los Ac que sí se unen a la proteína S, no todos se unen a las mismas regiones. La región RBD que es la llave de entrada a la célula humana.

De los Ac que sí se unen a la proteína S, y a la región RBD no todos son Ac Neutralizantes

Sólo los anticuerpos neutralizantes contra RBD neutralizantes son los encargados de bloquear la entrada. AcN anti RBD→ Protección impidiendo la entrada.

Capacidad neutralizante en porcentaje (%INH):

¿Cómo de potente es la neutralización de tus AcN? cPass nos da este parámetro llamado % de inhibición por que mide cuánto inhiben o impiden tus AcN la unión de RBD al receptor humano. La configuración de cPass permite sustituir de manera muy sencilla los ensayos clásicos de neutralización en placa o PRNT. No hacen falta células ni virus vivo, ni laboratorios P3, ni esperar 72h a tener los resultados. Además, los resultados entre ambas técnicas son perfectamente comparables.

El Positivo / Negativo establece un valor umbral (30% de inhibición). El kit proporciona un control positivo y negativo que se miden por duplicado. El resto de pocillos, 92, están disponibles para la medición de muestras. De cada muestra se puede calcular:

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Los AcN juegan un papel clave en el seguimiento de la vacunación, evaluación de la inmunidad humoral, selección de donantes de plasma y desarrollo de nuevas terapias para combatir SARS-CoV2.

CPassTM proporciona información esencial sobre el nivel de AcN de manera fiable, rápida, a bajo coste y escalable(2).

Bibliografía

1. VanBlargan LA, Goo L, Pierson TC. Deconstructing the Antiviral Neutralizing-Antibody Response: Implications for Vaccine Development and Immunity. Microbiol Mol Biol Rev. 2016 Oct 26;80(4):989-1010. doi: 10.1128/MMBR.00024-15. PMID: 27784796; PMCID: PMC5116878.

2. Tan CW, Chia WN, Qin X, Liu P, Chen MI, Tiu C, Hu Z, Chen VC, Young BE, Sia WR, Tan YJ, Foo R, Yi Y, Lye DC, Anderson DE, Wang LF. A SARS-CoV-2 surrogate virus neutralization test based on antibody-mediated blockage of ACE2-spike protein-protein interaction. Nat Biotechnol. 2020 Sep;38(9):1073-1078. doi: 10.1038/s41587-020-0631-z. Epub 2020 Jul 23. PMID: 32704169.

3. Valcourt EJ, Manguiat K, Robinson A, Chen JC, Dimitrova K, Philipson C, Lamoureux L, McLachlan E, Schiffman Z, Drebot MA, Wood H. Evaluation of a commercially-available surrogate virus neutralization test for severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2). Diagn Microbiol Infect Dis. 2020 Dec 24;99(4):115294. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2020.115294. Epub ahead of print. PMID: 33387896; PMCID: PMC7758721.

4.Meyer B, Reimerink J, Torriani G, Brouwer F, Godeke GJ, Yerly S, Hoogerwerf M, Vuilleumier N, Kaiser L, Eckerle I, Reusken C. Validation and clinical evaluation of a SARS-CoV-2 surrogate virus neutralisation test (sVNT). Emerg Microbes Infect. 2020 Dec;9(1):2394-2403. doi: 10.1080/22221751.2020.1835448. PMID: 33043818; PMCID: PMC7605318.

5. WHO (World Health Organization). Protocolo para estudios seroepidemiológicos poblacionales sobre la COVID-19, con estratificación por edades. Version 2. May, 2020.

6. Ministerio de ciencia y tecnología, Ministerio de Sanidad, Gobierno de España. Insitituto de Salud Carlos III, Consejo Interterritorial, Sistema Nacional de Salud. Estudio ENE-COVID: Cuarta ronda. Estudio Nacional de Sero-epidemiología de la infección por Sars-CoV2 en España. Dec 2020.

7. Consejo Inter-territorial. Sistema Nacional de Salud. Ministerio de Sanidad, Gobiernos de España. Grupo de trabajo de vacunación. Estrategia de vacunación. Version 2 Dec 2020.

8. Tan SS, Saw S, Chew KL, Huak CY, Khoo C, Pajarillaga A, Wang W, Tambyah P, Ong L, Jureen R, Sethi SK. Head-to-head evaluation on diagnostic accuracies of six SARS-CoV-2 serological assays. Pathology. 2020 Dec;52(7):770-777. doi: 10.1016/j.pathol.2020.09.007. Epub 2020 Sep 30. PMID: 33092816; PMCID: PMC7524664.

9. Bian C, Zhang X, Cai X, Zhang L, Chen Z, Zha Y, Xu Y, Xu K, Lu W, Yan L, Yuan J, Feng J, Hao P, Wang Q, Zhao G, Liu G, Zhu X, Shen H, Zheng B, Shen B, Sun B. Conserved amino acids W423 and N424 in receptor-binding domain of SARS-CoV are potential targets for therapeutic monoclonal antibody. Virology. 2009 Jan 5;383(1):39-46. doi: 10.1016/j.virol.2008.09.029. Epub 2008 Nov 4. PMID: 18986662; PMCID: PMC7103409.

10. Thijssen M, Devos T, Ejtahed HS, Amini-Bavil-Olyaee S, Pourfathollah AA, Pourkarim MR. Convalescent Plasma against COVID-19: A Broad-Spectrum Therapeutic Approach for Emerging Infectious Diseases. Microorganisms. 2020 Nov 5;8(11):1733. doi: 10.3390/microorganisms8111733. PMID: 33167389; PMCID: PMC7694357.

11. Lee WT, Girardin RC, Dupuis AP, Kulas KE, Payne AF, Wong SJ, Arinsburg S, Nguyen FT, Mendu DR, Firpo-Betancourt A, Jhang J, Wajnberg A, Krammer F, Cordon-Cardo C, Amler S, Montecalvo M, Hutton B, Taylor J, McDonough KA. Neutralizing Antibody Responses in COVID-19 Convalescent Sera. J Infect Dis. 2021 Jan 4;223(1):47-55. doi: 10.1093/infdis/jiaa673. PMID: 33104179; PMCID: PMC7665673.

12. Quantification Protocol Certified by GenScript – waiting for more info. 13. Vaccine Research and Development Application Note – GenScript 14. Convalescent Plasma Therapy Application Note – GenScript 15. Letter of Authorization, Reissuance of Convalescent Plasma EUA February 4, 2021 – FDA

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